細胞總培養(yǎng)不好,，是支原體在作亂嗎,？
實驗室里總會有各式各樣的細胞需要培養(yǎng)，養(yǎng)細胞的會發(fā)生一些囧事：不做實驗的時候,，細胞長得老快了,；一到做實驗的時候,，自家的細胞好像吃了安眠藥一樣，昏昏欲睡,，死活長不起來,。
導(dǎo)致細胞生長緩慢的常見原因：
細胞生長緩慢；
細胞變形,；
碎片增加,；
懸浮細胞容易成團；
培養(yǎng)基提前變色,；
鏡下發(fā)現(xiàn)有小黑點,；
如果排除了其他試劑選擇不當(dāng)、細胞株老化,、細菌污染……原因,，而仍有上述一種或幾種情況，則高度提示：細胞可能出現(xiàn)了支原體污染,。據(jù)報道,，細胞培養(yǎng)中發(fā)生支原體污染的機率較高，會達到70%左右,，常規(guī)抗生素的使用對支原體幾乎無效,。
那么，支原體污染,，對細胞培養(yǎng)有什么危害呢,？
支原體穿透真核細胞表面 大量支原體聚集在真核細胞表面（掃描電鏡照片）
細胞被支原體污染，解決方案：
方法一：確認細胞已被支原體污染，終止試驗,，丟棄所有被污染的細胞和耗材,。重新復(fù)蘇細胞，注意選用未被污染的細胞株,、血清和培養(yǎng)基,，并規(guī)范操作。
方法二：對于珍貴的,，樣品不可再得的細胞,，或價格昂貴的種子細胞，不但無法丟棄,，而且作為種子細胞,，還需要徹底根除支原體污染。
此時,，需選用特異性的支原體殺除劑,，清除污染，保護細胞,。
目前世界上最有效的方法是是德國的一款專利生物試劑,，由Minerva公司生產(chǎn)，品名Mynox?,。此試劑可在2-3小時內(nèi)將支原體主動殺除,，但對細胞無毒害作用。特別適合細胞保種,。
Mynox?為枯草桿菌中提取出的生物制劑,，加入培養(yǎng)液中，可特異性地與支原體膜結(jié)合,，改變膜通透性,。通過此生物物理的方法，2～3小時內(nèi),，即可把細胞中的支原體殺除掉。因為細胞膜結(jié)構(gòu)與支原體膜不同,，故Mynox?不會與細胞膜結(jié)合,，因此無細胞毒性。注意：3小時后,，需將此試劑洗脫,，將細胞更換到新的培養(yǎng)耗材和培養(yǎng)液中，重新培養(yǎng),。此時,，不應(yīng)使用PCR方法檢測細胞中支原體。由于支原體解體，故PCR結(jié)果為假性強陽性,。具體操作流程見下圖：Mynox?祛除貼壁細胞中支原體的流程圖Mynox?殺除支原體功能強大有效,，但由于價格昂貴，上圖中使用的200ul人民幣要5000元左右,，使得應(yīng)用于細胞保種的數(shù)量受到價格的限制,。
方法三：對于已耗費很多時間，大量擴增起來的細胞,，或經(jīng)過基因轉(zhuǎn)染,、體外刺激等大量工作處理過的細胞，如果發(fā)現(xiàn)細胞被支原體污染了,，怎么辦,？
此時由于前期工作量巨大，使操作人員無法丟棄已有細胞,。但由于價格原因,，又無法使用方法二提到的昂貴試劑殺除細胞上的支原體，同時,，實驗人員還需要清除細胞上的支原體污染,，讓實驗得以往下推進，以最終獲得準(zhǔn)確的實驗數(shù)據(jù),。
此時,，實驗者可選用對支原體特效的抑制劑，通過對細胞的前期處理,，中期加藥,，逐步通過4代左右的培養(yǎng)，得以將支原體污染徹底清除,，確保試驗順利推進,，結(jié)果準(zhǔn)確。
細胞培養(yǎng)中,，支原體污染發(fā)生頻繁,。有時帶來的危害會造成實驗的巨大損失。應(yīng)經(jīng)常檢測和及時排除支原體污染,，讓細胞在健康安全的環(huán)境下生長,，為獲得準(zhǔn)確的實驗結(jié)果，打下良好的基礎(chǔ),。（來源：締一生物）